A festmény elkészítésével és elkészítésével Leonardo életének végén visszatért hozzá. Giorgio Vasari szerint szülővárosába való visszatérése után megrendelést kapott a Firenzében található Santissima Annunziata templom oltárának festésére.
A kolostorban, a templomban dolgozva először előzetes rajzot készített. Vannak olyan dokumentumok, amelyek szerint a rajz két napig volt rajzolva, és csodálatot okozott. Előttünk van egy mozdulatokkal teli jelenet: Mary anyja ölében van, Szent Anna. Egyéves kisbabája kitört anyja karjából. A férfi elfordult tőle, bárányval játszik.
Már majdnem felállt a Szent Anna térdeiből, Mary megpróbálja visszahúzni a babát. Talán Anna képviseli az egyházat, amely nem akarja, hogy bármi akadályozza a Krisztus szenvedélyét. Vannak olyan elemek, amelyek hasonlóak a “Burlington ház karton” – hoz. Különösen meglepő, hogy Maria és édesanyja arcai nem éreznek különbséget életkorban, mint más művészek festményein.
Ezen felül úgy tűnik, hogy a nők számadatok beleolvadnak egy, még egy csecsemőbe is. Mindez hangsúlyozza Anna, Mária és Krisztus közötti szoros kapcsolatot, ám mindegyikük elhelyezkedése jelzi a családjában játszott szerepét. A mozgások gazdagsága mellett a hatalmas tájban feltűnő a festészet, a kép egyharmadát elfoglalva, ez jellemző Leonardo da Vinci művére. A csoport felett magas hegyek és völgyek, sőt hegyvidék emelkedik fel. A természet a legfontosabb! A táj szimbolizmusként is értelmezhető: kopár, napsugárzott föld, erős fény, Mária gyermekekért jelképe.